In 480 voor Christus geeft de koning van Sparta leiding aan de slag om Thermopylae. Hij gaat hier samen met zijn troepen de strijd aan tegen de opkomende Perzen.
De film vertelt het verhaal van de titanenstrijd op leven en dood die Koning Leonidas en 300 Spartanen leverden tegen Xerxes en zijn enorme Perzische leger.
In de smalle bergpas valt voor een kleine hechte groep strijders groot voordeel te behalen. Zolang de rangen maar gesloten blijven is er bijna geen doorkomen aan.
Door de opoffering van deze zelfmoordveldtocht kreeg het Griekse leger extra tijd om zich te organiseren tegen de oprukkende Perzen en Leonidas en zijn driehonderd Spartanen schreven geschiedenis.
Deze confrontatie zal leiden tot īs werelds eerste democratie.